Анализ ПЦР: что это такое, что показывает кровь, расшифровка исследования, подготовка и как сдавать

Анализ ПЦР: что это такое, что показывает кровь, расшифровка исследования, подготовка и как сдаватьАнализ ПЦР на 12 инфекций – это метод исследования, который основывается на использовании полимеразной цепной реакции, что в свою очередь позволяет обследовать пациента на наличие инфекционных и наследственных заболеваний независимо от их стадии: острой или хронической. Такой анализ может демонстрировать положительный результат задолго до проявления симптомов различных заболеваний.

Преимущества ПЦР-анализа

Процедура диагностики инфекционных процессов с помощью метода ПЦР сегодня очень актуальна.

Среди ее преимуществ следует отметить обнаружение инфекционных агентов без наличия характерных симптомов заболевания, готовность результатов уже через четыре часа после процедуры, максимальную чувствительность к возбудителям заболеваний (демонстрирует положительный результат даже при наличии всего нескольких молекул ДНК патогенной клетки).

Ошибочные и ложные реакции практически исключены, а кроме того анализ позволяет выявить РНК или ДНК инфекционного агента.

На данный момент диагностическая методика проходит активные этапы усовершенствования, появляются новые разновидности ПЦР.

Принцип ПЦР

Процедура диагностики проводится только в лабораторных условиях и базируется на многократном удвоении определённого участка ДНК и РНК при помощи ферментов в искусственных условиях.

В результате нарабатываются количества ДНК и РНК, достаточные для визуальной детекции.

При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Каждая лаборатория, работающая с этим методом диагностики, обладает специальной базой данных, которая позволяет точно определить наличие того или иного инфекционного агента.

Количество лабораторий, которые предлагают подобного рода методику, с каждым днем увеличивается, что позволяет диагностировать каждого желающего. Метод ПЦР позволяет не только определить наличие возбудителя, но и максимально точно подсчитать его количественное соотношение.

Кроме увеличения числа копий ДНК и РНК, ПЦР позволяет производить другие манипуляции с генетическим материалом: введение мутаций, сращивание определенных фрагментов ДНК и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для установления отцовства, клонирования генов и выделения новых генов.

Инфекции, которые можно выявить посредством ПЦР-анализа

Анализ ПЦР: что это такое, что показывает кровь, расшифровка исследования, подготовка и как сдаватьПЦР-анализ активно используют гинекологи, онкологи, гастроэнтерологи, фтизиатры, пульмонологи и др. Анализ ПЦР позволяет выявить возбудителей следующих инфекционных процессов:

  • инфекции хеликобактер пилори;
  • кандидозные инфекции;
  • ВПЧ и его онкогенные подвиды;
  • инфекции, которые передаются половым путем;
  • ВИЧ;
  • герпес первого и второго типа, гепатиты;
  • микобактерии туберкулеза;
  • вирус Эпштейн-Барра;
  • цитомегаловирус (ЦМВ);
  • вирус герпеса человека (ВГЧ) 6 типа;
  • коронавирус COVID-19.

И это лишь основная часть инфекций, которые можно определить посредством использования ПЦР-анализа.

Правила и алгоритм проведения забора материала для анализа

Для того, чтобы определить у пациента наличие инфекции, которая передается через половой контакт, берут на исследование мазок/соскоб из половых органов или урину.

В случае, если исследование производится с целью определения инфекционных заболеваний, таких как гепатит, герпес, ВИЧ и т.д., используется венозная кровь пациента. Для исследования на наличие мононуклеоза (вируса Эпштейн-Барра) используется мазок из ротовой полости.

Иногда для анализа необходима спинномозговая жидкость – она позволяет определить причину появления определенных неврологических заболеваний.

Если же у новорожденного ребенка есть подозрение на наличие внутриутробного инфицирования, для исследования берут кусочек плаценты и пробу околоплодных вод. Для теста на коронавирус Covid-19 берется мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2.

Результаты проведения диагностики максимально достоверны, и ошибка практически исключена. Достоверность процедуры напрямую зависит от того, насколько правильно были взяты материалы для проведения анализа.

Среди самых важных рекомендаций перед сдачей материала на анализ стоит отметить то, что моча собирается в утреннее время в специальный стерильный контейнер, кровь сдают утром натощак.

Кроме того, за 24 часа до процедуры запрещается вступать в половой контакт, а перед сдачей мазка необходимо за два часа провести акт мочеиспускания.

Женщинам за двое суток до процедуры нужно отказаться от спринцевания и введения суппозиторий во влагалище.

Результаты анализа могут быть готовы как за четыре часа, так и за двое суток, все напрямую зависит от диагностируемого заболевания и качества взятого на анализ материала.

Расшифровка результатов

Результат может оказаться как отрицательным, так и положительным. Отрицательный ответ демонстрирует что во взятом на анализ образце не обнаружено исследуемых патогенных клеток инфекционного типа.

Положительный анализ указывает на наличие в предоставленном для анализа образце инфекционных агентов.

При позитивном результате анализа необходимо максимально быстро подобрать эффективное и качественное лечение.

Положительный результат без наличия симптоматики заболевания является показателем ранней стадии развития заболевания либо того, что пациент является носителем инфекции. В отношении к носителям медикаментозная терапия не применяется, но регулярно проводятся контрольные анализы для отслеживания динамики. Среди таких заболеваний – герпес и папилломавирусная инфекция.

Если пациент является носителем инфекционного заболевания – он подвергает опасности всех окружающих, следовательно, рекомендуется проводить терапию, которая будет блокировать распространение инфекции.

В результатах указываются также количественные характеристики патогенных клеток, основываясь на которых врач определяет активность заболевания и подбирает максимально эффективный терапевтический курс. Среди самых важных характеристик анализа ПЦР на 12 инфекций стоит отметить: чувствительность, специфичность и точность.

Автор статьи:

Фурманова Елена Александровна

  • Специальность: врач педиатр, инфекционист, аллерголог-иммунолог.
  • Общий стаж: 7 лет.
  • Образование: 2010, СибГМУ, педиатрический, педиатрия.

Что значит ПЦР РНК анализ гепатита С? блог компании H-Clinic анализы гепатиты тестирование

15.05.2020

Анализ ПЦР: что это такое, что показывает кровь, расшифровка исследования, подготовка и как сдавать

Гепатит С – это вирусная инфекция, которая поражает печень.

Проявления ее могут быть очень разнообразными – от нетяжелого заболевания, которое проходит без  лечения через несколько недель, до серьезной, хронической болезни, которая без специальной терапии  может приводить к развитию цирроза печени и гибели пациента. В то же время хронический гепатит С нередко длительное время протекает бессимптомно, и человек может даже не подозревать о наличии у него данного заболевания. 

Чтобы выявить максимальное число людей, зараженных вирусом, в нашей стране проводится скрининговое обследование разных групп населения на гепатит С. Это исследование крови на антитела, его также называют исследование – anti-HCV.

Скрининговое обследование –  это диагностическая процедура, которая позволяет с высокой степенью вероятности исключить болезнь среди людей, у которых нет явных симптомов.

Иными словами, это лабораторный или инструментальный метод, который позволяет быстро, эффективно и недорого обследовать большое количество людей, которые не имеют жалоб, для того чтобы на ранних стадиях выявить заболевание, и излечить его в более короткие сроки и с лучшими результатами. Подобным примером является флюорографический скрининг взрослых для выявления заболеваний легких (в первую очередь, туберкулеза).

Однако подобные скрининговые методы, как правило, не являются  окончательными в постановке диагноза, и требуют дальнейшего дообследования. В случае с гепатитом С таким уточняющим анализом является определение РНК вируса гепатита С в крови, который позволяет выявить непосредственно сам вирус, вернее, его генетический материал. 

Как мы уже неоднократно упоминали в нашем блоге, просто наличие антител не является основанием для установления диагноза в случае с большинством инфекций.

Дело в том, что антитела образуются как защитная реакция организма на проникновение чужеродного агента, и могут сохраняться очень длительное время даже после выздоровления.

Таким образом, человек, у которого при скрининговом обследовании обнаружены антитела к гепатиту С, может и не иметь вируса в крови, а значит и самого заболевания. Такое возможно,  если заболевание было перенесено в острой форме и иммунитет смог без помощи лекарств самостоятельно избавиться от вируса.

Самовыздоровление от вирусного гепатита С, к сожалению, происходит достаточно редко – около 15-20% от всех случаев заражения вирусом. Также положительный анализ на anti-HCV антитела обычно длительно сохраняется у людей, излечившихся от гепатита после получения курса противовирусных препаратов.

Для того, чтобы уточнить, присутствует ли до сих пор вирус в организме пациента врач и назначает анализ – ПЦР РНК вируса гепатита С. Выявление в крови РНК вируса гепатита С будет говорить о наличии активно протекающего заболевания, которое требует начала специфической терапии.

Кровь на РНК можно исследовать качественным методом и количественным. В соответствии с названием, качественный метод отвечает только лишь на вопрос, присутствует ли вирус в организме; при исследовании же количественным методом мы получаем информацию, сколько именно единиц вируса содержится в 1 мл крови, то есть можем судить о том, насколько активно размножается вирус.

Дополнительно к анализу на РНК ВГС перед лечением также рекомендуется определение генотипа вируса. Вирус гепатита С имеет 6 генотипов и большое число подтипов. В нашей стране наиболее распространены первые генотипы 1, 2 и 3.

Читайте также:  Какие антибиотики можно принимать при поносе

Основная информация, которую дает врачу результат данного анализа, — к каким препаратам вирус чувствителен, то есть определяет выбор правильной схемы лечения. Конечно, в наше время существуют уже и так называемые «пангенотипические» схемы, которые эффективны против всех генотипов вируса.

Однако в случае, если генотип вируса известен, количество схем, из которых можно выбирать наиболее подходящую каждому конкретному пациенту (с учетом сопутствующих заболеваний и других лекарственных препаратов, которые тот принимает), существенно расширяется.

Также данный результат дает дополнительную информацию при дальнейшем наблюдении за пациентом. В случае, если после проведенного курса терапии вновь выявляется вирус, можно с большей вероятностью  выяснить, является ли это неудачей лечения или повторным заражением.

Именно поэтому в современных рекомендациях по лечению гепатита С – как  в Европе, так и  в Америке рекомендуется проводить генотипирование до начала терапии.

Помимо обследования до начала терапии, анализ на ПЦР РНК ВГС необходим для суждения об исходах лечения.

Как уже упоминалось, анализ на anti HCV (антитела к вирусу гепатита С) в этом случае, наиболее вероятно, будет сохраняться положительным, и значит, не несет никакой ценной информации для врача.

Критерием же полного излечения является отсутствие вируса в крови через 12 недель после проведенного курса терапии.

Хотелось бы отметить, что, если у вас в крови обнаружены антитела к гепатиту С, даже в случае абсолютно нормального самочувствия, необходимо обратиться к врачу для дообследования. Вялотекущее воспаление в печени рано или поздно приводит к перестройке ее ткани, ухудшению функции и, в конце концов, к развитию цирроза.

Существующие же в наше время схемы терапии гепатита С позволяют в достаточно короткие сроки (обычно за 3 месяца), с минимальной вероятностью побочных эффектов и высокой эффективностью избавиться от вируса.

Именно поэтому лечение хронического гепатита С в настоящее время рекомендуется всем пациентам с достоверно установленным диагнозом.

врач-инфекционист Университетской клиники H-Clinic Дегтярёва Светлана Юрьевна.

Медицинский редактор: руководитель Университетской клиники, к.м.н., врач-инфекционист Коннов Данила Сергеевич.

Возврат к списку

ПЦР-анализ

В зависимости от поставленной задачи, материалом для ПЦР-диагностики могут служить:

  • соскобы эпителиальных клеток (кожные покровы, слизистая уретры, цервикального канала, др.);
  • смывы с конъюнктивы и др.;
  • кровь, биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, др.);
  • моча, мокрота,слюна, слизь и другие биологические выделения;
  • биоптаты органов.

Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу (ДНК-диагностике)

Достоверность результатов лабораторной диагностики зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. Ничего сложного в правильной подготовке нет.

При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие инструкции:

Анализ ПЦР: что это такое, что показывает кровь, расшифровка исследования, подготовка и как сдавать1. Кровь

Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т.е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку. Забор крови проводится из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную пробирку типа Vacutainer (крышка сиреневого цвета, в качестве консерванта — ЭДТА). Запрещается использовать другие вещества в качестве антикоагулянта.

Пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С.

Максимальный срок хранения: при исследовании на вирусные гепатиты до 2 суток, при исследовании на другие инфекции до 5 часов (при +4°С, или 1 мес. при -20°С).

2. Моча

Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10-50 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора.

Максимальный срок хранения отобранного материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

3. Слюна

Перед забором слюныпроизводится трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Забор слюны производится в одноразовые пробирки в количестве 3-5 мл.

Материал необходимо отбирать непосредственно перед исследованием и немедленно доставлять в лабораторию. При невозможности быстрой доставки материал замораживают при -20°С.

Последующая транспортировка осуществляется в замороженном виде (в термосе со льдом).

4. Мазок из ротоглотки

Мазок материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора с задней стенки глотки и крипт миндалин. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

5. Мокрота и плевральный выпот

Материал отбирают в специальные флаконы в количестве 5-10 мл.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

6. Биопсийный материал

Материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

7. Синовиальная жидкость

Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

8. Забор материала для анализа на урогенитальные инфекции

За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью.

Не мочиться за 1-2 часа до забора материала.

У женщин забор материала производится из трех различных точек: цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-I/II, Haemophilusducrei). Забор производится универсальным зондом или ложкой Фолькмана. Не допускается наличие в мазке крови или слизи.

Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). Если забор материала производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе (транспортной среде), содержащимся в одноразовой пробирке Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Забор материала у мужчин производится универсальным зондом или цитощеткой из уретры. Обычно перед процедурой уретру обрабатывают физраствором. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв.

В случае забора материала универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). После взятия материала цитощеткой, она опускается в пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой), несколько раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Не допускается наличие в мазке крови.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше).

Срок проведения

Результат ПЦР-диагностикиобычно можно получить через 2-3 рабочих дня после сдачи анализа.

Возможно получение результатов ПЦР-теста в течение одного рабочего дня.

Как долго делается анализ ПЦР при различных инфекциях

Анализ ПЦР — самый чувствительный и точный метод, используемый для диагностики инфекций, передающихся половым путем. Его применяют не только при ЗППП, но и для оценки условно-патогенной микрофлоры влагалища, кишечника, дыхательной системы. Сроки ПЦР различны для разных инфекций и зависят от варианта выполнения анализа: качественного или количественного.

Сколько готовится анализ ПЦР больше всего волнует, конечно же, пациентов с венерическими заболеваниями или с подозрением на них. Потому что очень важно и вовремя начать лечение, и не заразить близких людей.

Для большинства половых инфекций срок выполнения качественного ПЦР анализа, который как раз и определяет наличие той или иной инфекции, составляет 1 день. За сутки можно обнаружить хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллы, трихомонады, гонорею, герпес, цитомегаловирус, ВПЧ, кандиду и многие другие виды микроорганизмов, вызывающих ЗППП. Материал для исследования — это обычно:

  1. Соскоб из уретры, с головки полового члена или влагалища.
  2. Соскоб со слизистой оболочки ротоглотки, конъюнктивы, прямой кишки.
  3. Соскоб с эрозий и язвочек.
  4. Моча.
  5. Секрет простаты, сперма.
  6. Мокрота, слюна.
Читайте также:  Ребенок не говорит в 3 года: что делать, причины (Комаровский)

Несколько дольше выполняются количественные анализы ПЦР, которые определяют не только возбудителя, но и его количество на слизистой оболочке или в биологической жидкости. Срок такого ПЦР анализа 2–3 дня.

ДНК диагностика ИППП проводится не только при помощи соскобов. Для ряда инфекций берут кровь и определяют наличие вирусов в 1 мл. Такие исследования необходимы при обследовании на ВИЧ, гепатиты, ЦМВ, герпес-вирусы, токсоплазмоз.

Сколько дней делают ПЦР на ВИЧ волнует не меньше, чем при диагностике бактериальных ЗППП. Дело в том, что этот анализ является самым ранним из анализов на СПИД/ВИЧ и показывает наличие РНК вируса иммунодефицита, когда остальные анализы еще не реагируют.

Качественные ПЦР анализы крови на ВИЧ, гепатиты и другие инфекции в основном делаются до 3 дней. Количественные могут занимать 5–7, иногда до 14.

Сколько готовится анализ ПЦР зависит не только от вида выявляемого вируса или бактерии, но и от лаборатории, которая его выполняет. В наших клиниках доставка исследуемого материала производится в течение нескольких часов непосредственно в лабораторию.

Поэтому сроки ПЦР в режиме реального времени минимальны, а точность исследования составляет 99–100%.

Анализы наших пациентов проводятся только в тех клинико-диагностических лабораториях, которые наилучшим образом зарекомендовали себя в выполнении анализа ПЦР.

Быстрее, чем описано в данной статье, анализ ПЦР выполняться не может в силу своей технологии, так как для выращивания цепочек ДНК или РНК необходимо время.

HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]: исследования в лаборатории KDLmed

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×102 – 1,0×108копий/мл образца.

  • Синонимы русские
  • Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.
  • Синонимыанглийские
  • Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.
  • Метод исследования
  • Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Венозную кровь.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.
  • Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень.

Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.

HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой).

У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.

У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания.

Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается.

Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса.

Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
  • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите С.
  • При микст-гепатитах.
  • При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Что означают результаты?

  • Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 40 МЕ/мл).
  • < 7,5*10^2 копий/мл (
  • < 2*10^6 копий/мл (< 8*10^5 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Низкая виремия (наиболее благоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии).
  • > 2*10^6  копий/мл (>8*10^5 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
  • >1,0*10^8 копий/мл (>2,4*10^7 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.
  1. Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (1,8*10^2 – 2,4*10^7 МЕ/мл).
  2. Что может влиять на результат?
  3. Недостоверный результат может быть получен при:
  • загрязнении биоматериала;
  • наличии в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
  • присутствии в крови гепарина.

Важные замечания

  • Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
  • При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.
  • Также рекомендуется
  • Кто назначает исследование?
  • Инфекционист, гепатолог.
  • Литература
  • Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
  • Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
  • Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

О рекомендациях, как подготовиться к сдаче пцр-теста на covid-19

 В условиях сохранения рисков распространения новой коронавирусной инфекции Роспотребнадзор напоминает, что при сдаче ПЦР-теста необходимо соблюдать определенные рекомендации.

Что будет, если есть или пить перед сдачей мазков для теста ПЦР?

По инструкции к наборам для ПЦР-исследования на SARS-CoV-2 взятие мазков рекомендуется проводить не раньше 3-4 часов после последнего приёма пищи. Почему это важно?

Коронавирус SARS-Cov-2 живет внутри эпителиальных клеток. Для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. В момент проглатывания еды эпителиальные клетки механически слущиваются пищевым комком с поверхности слизистой оболочки.

Если взять мазок сразу после еды, в пробирку может попасть недостаточное количество инфицированных клеток. В этом случае, пациент может получить ложноотрицательный результат анализа. То же самое касается питья.

Вода смывает с поверхности миндалин, задней стенки глотки инфицированные клетки.

Можно ли пользоваться лекарственными средствами в нос и горло (капли, спреи, антисептики) перед сдачей мазков?

Перед взятием мазков ни в коем случае нельзя использовать лекарственные средства для местного применения (капли, спреи и др). После их применения количество вируса на слизистой снижается и увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов ПЦР-теста.

Читайте также:  Боль в пояснице отдающая в ногу — полный анализ, причины, лечение и профилактика

Можно ли употреблять алкоголь перед сдачей теста ПЦР и как это повлияет на результат?

Алкоголь содержит этиловый спирт (этанол), который также входит в состав многих антисептических средств.

По рекомендациям Роспотребнадзора, для эффективного антисептического действия в составе дезинфицирующего средства должно быть не менее 60-80% этилового спирта.

Хотя в состав спиртных напитков (обычно) входит меньше этанола, чем необходимо для дезинфекции, но после приема алкоголя вероятность выявления коронавируса в мазке также может снизиться.

Почему нельзя чистить зубы перед сдачей теста ПЦР?

Основная цель на этапе взятия мазков для ПЦР-исследования – получить биологический материал с достаточным количеством клеток, пораженных коронавирусом. Применение любых очищающих средств для полости рта снижает количество вируса в получаемом мазке.

Зубная паста может содержать антисептические компоненты. Попадание ее остатков в пробирку с мазком может мешать проведению анализа.

Кроме того, чистка зубов требует еще и дополнительного полоскания рта, что также не рекомендовано перед забором биоматериала.

Применение косметики (помады, блески и бальзамы для губ) может повлиять на результат теста?

Материал для исследования берут не из полости рта, а из зева и носоглотки.

Если соблюдать все правила взятия мазка и не прикасаться зондом к губам, то наличие декоративной косметики не должно помешать получению адекватного материала для ПЦР-теста.

Но при случайном попадании в пробу косметические средства могут замедлить ПЦР-реакцию. Поэтому лучше декоративную косметику нанести уже после того, как мазок был взят.

Откуда все-таки берут мазок – из зева или носоглотки?

И из зева, и из носоглотки. Входными воротами для вируса SARS-CoV-2 являются верхние дыхательные пути. После попадания на слизистые носо- и ротоглотки (зева) вирус начинает размножаться в эпителиальных клетках.

Поэтому в конце инкубационного периода и в первые дни клинических проявлений наиболее информативными являются мазки именно из этих областей. Для исследования мазок берут с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки.

При взятии мазка из носоглотки зонд вводят по наружной стенке носового хода на достаточную глубину. Мазок, взятый со слизистой преддверия носа, может не выявить РНК коронавируса SARS-CoV-2.

  • Важно!
  • Минимум за 3 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) нельзя: принимать пищу, пить, чистить зубы, полоскать рот/горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить.
  • Минимум за 3 часа до взятия мазков из носоглотки нельзя: промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа.
  • За два дня до взятия мазка рекомендуется отказаться от употребления спиртных напитков.

Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция, ПЦР (англ. — PCR — polymerase chain reaction) не сходит с заголовков статей научных журналов с тех пор, как была открыта Кэри Б. Мюллисом в 1983 году, за что он был удостоен Нобелевской премии.

О методе пцр

ПЦР — это метод, который позволяет найти в исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической информации (ДНК) инфекционного возбудителя и многократно размножить его.

Другие методы диагностики половых инфекций

В диагностике инфекций передаваемых половым путем (ИППП) также используются следующие методики:

  • микроскопия — исследование неокрашенных и окрашенных препаратов в светооптическом микроскопе. Точность метода зависит от опыта врача-лаборанта. Как правило хорошо диагностируются гонококки, трихомонады, гарднереллы и кандиды (бактерии больших размеров). Другие инфекции не видны под микроскопом, так как очень маленького размера.
  • бактериология — культивирование (выращивание) инфекций на питательных средах. До практического использования ПЦР, бактериальное исследование считалось «золотым стандартом» в диагностике ИППП, т. е. самым точным методом. Большим плюсом данной методики является возможность определения чувствительности микробов к антибиотикам. Минусом — необходимость быстрой доставки клинического материала в лабораторию, пока микробы не погибли в окружающей среде, не все ИППП растут на питательных средах, необходимость использования качественных питательных сред, сроки получения результатов — 5 — 7 дней.
  • иммуноферментный анализ — определение специфических антител (белков), вырабатываемых в ответ на внедрение микробов (антигенов) в сыворотке крови. То есть выявляют не сам микроб, а антитела которые вырабатывает организме человека. Плюсом метода является возможность определение стадии инфекционного процесса (в острой стадии определяются иммуноглобулины (антитела) класса М, в хронической — иммуноглобулины класса G). Минусом — отсутствие выработки антител у пациентов с иммунодефицитом, перекрестная реакция антител со схожими микробами, низкие показатели чувствительности и специфичности. На основании результатов только ИФА без подтверждения другими методами диагностики и при отсутствии клинических проявлений выставлять диагноз не представляется возможным.

О точности метода пцр при диагностике инфекций

В настоящее время ПЦР является самым точным методом диагностики инфекционных заболеваний. Точность любого метода диагностики в медицине оценивается такими понятиями как чувствительность и специфичность. Чувствительность — процент положительных результатов среди обследованных инфицированных лиц.

Это значит, что при обследовании 100 человек больных хламидиозом методом ПЦР диагноз будет подтвержден у 98-99 человек, а у 1-2 человек из 100 будет установлен ложноотрицательный результат. Чувствительность ИФА в диагностике инфекций передаваемых половым путем — 50-60%. Это значит, что у 40-50 людей из 100 больных хламидиозом возможен ложноотрицательный результат.

Специфичность — процент отрицательных результатов среди обследованных здоровых лиц. Это значит , что при обследовании 100 здоровых людей на хламидии методом ПЦР у 97-98 обследуемых покажет отрицательный результат, а у 2-3 человек возможен ложноположительный результат. Специфичность ИФА составляет 60-70%.

  Ниже приведены показатели чувствительности и специфичности методов диагностики инфекций передаваемых половым путем.

Метод диагностики Чувствительность, % Специфичность, %
Микроскопия 20 — 60 70 — 80
Бактероилогия 40 — 80 80 — 90
ИФА -серология 50 — 60 60 — 70
ПЦР 98 — 99 97 — 98

Как видно из таблицы метод ПЦР обладает наилучшими результатами в диагностике инфекции передаваемых половым путем. Именно поэтому можно получить разные результаты исследования у одного человека, если он обследован разными методами диагностики. Но приоритет всегда должен отдаваться ПЦР, как самому точному из всех. 

О двух методиках пцр-анализа

На сегодняшний день существует 2 методики ПЦР-анализа: так называемая «форезная» и «ПЦР в реальном времени» (более современная).

Основным приемуществом методики ПЦР в реальном времени по сравнению с форезом является:

  • сведение к минимуму риска контаминации (загрязнение) лаборатории и связанных с ней ложно-положительных результатов и артефактов ПЦР-анализа
  • упрощение требований к организации лаборатории — отсутствует необходимость в изолированном дополнительном помещении для проведения этапа детекции и отдельного врача -лаборанта
  • автоматический анализ результатов с помощью компьютера, стандартизация результатов, исключение субъективности результатов (при форезной методике результат исследования определяется врачем-лаборантом, а при ПЦР в реальном времени — компьютером)
  • возможность количественной оценки содержания ДНК возбудителя в клиническом образце

От чего зависит, что показывает ПРЦ-тест?

Несмотря на высокую точность анализов, не редки случаи получения противоположных результатов в разных ПЦР-лабораториях. Это объясняется многими факторами. Критериями качественной работы лаборатории является:

  • использование сертифицированных тест — систем, обладающих высокой аналитической чувствительностью
  • использование внутренних и внешних контролей работы лаборатории
  • высокая воспроизводимость результатов (95 — 98%)
  • современное оборудование
  • квалифицированные специалисты
  • борьба с контаминацией (загрязнением лаборатории продуктами амплификации)
  • правильное расположение «рабочих» зон лаборатории
  • при наличии сомнительных результатов и артефактов ПЦР-анализа — их перестановка на различных этапах
  • архивирование результатов исследований с возможностью их просмотра в спорных случаях.

Таким образом, только сочетание грамотного специалиста и качественно работающей лаборатории могут обеспечить постановку правильного диагноза и как следствие быстрого и полного выздоровления.

Если возникает несоответствие клинической картины с результатами лабораторных исследований, необходимо повторное проведение анализов.

Единственное нужно понимать, что подтвердить диагноз, поставленный методом ПЦР, можно только методом ПЦР, выполненным в другой лаборатории или повторно в этой же, так как другие способы диагностики сильно уступают вышеуказанному методу диагностике.

Если вы хотите сдать ПЦР-анализы и получить профессиональную диагностику, то специалисты нашей клиники готовы оказать вам действительно качественные услуги.

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *